Luka sering dapat terjadi di dalam perawatan bidang kedokteran khususnya pada saat pembedahan, sehingga menimbulkan ketidaknyamanan pasien. Tenaga kesehatan memanfaatkan metode perawatan alternatif dalam mempercepat waktu penyembuhan luka. Tujuan penelitian ini mengetahui pengaruh ozon dalam mempercepat waktu penyembuhan luka insisi pada punggung tikus Wistar.Penelitian ini ekperimental laboratorik menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL). Subjek penelitian ini menggunakan 30 ekor tikus Wistar dibagi 5 kelompok yaitu kelompok akuades sebagai kontrol negatif, kelompok akuades diozonisasi diberikan 1 menit, 3 menit, 5 menit, dan kelompok povidone iodine 10% sebagai kontrol positif. Punggung tikus dibuat luka insisi sepanjang 2 cm kedalaman 2 mm, kemudian diberi berbagai perlakuan dan parameter yang diukur waktu menutupnya luka sampai sekitar 21 hari dan diukur dalam satuan hari. Data dianalisis menggunakan uji one way ANOVA α=0,05 dilanjutkan dengan Tukey HSD. Hasil penelitian menunjukkan adanya perbedaan sangat signifikan (p=0,00) antara rerata waktu penyembuhan luka kelompok yang diberi akuades diozonisasi 3 menit (7.4 hari), akuades diozonisasi 1 menit (7,8 hari), akuades diozonisasi 5 menit (8 hari) dibandingkan kelompok akuades (18,2 hari) dan povidone iodine 10% (17,2 hari).Kesimpulan penelitian ini ozon mempercepat waktu proses penyembuhan luka pada punggung tikus Wistar.