Metode penetapan residu hormon dietilstilbestrol telah dikembangkan oleh BBPBAT Sukabumi sebagai laboratorium acuan di Indonesia untuk analisis residu untuk keperluan ekspor ikan nila. LC-MS/MS digunakan untuk kuantisasi dan konfirmasi terhadap residu hormon dietilstilbestrol pada ikan nila. Sampel didapatkan dari pedagagang ikan di pasar tradisional Cihaurgeulis Bandung yang berjumlah 4 pedagang. Sampel ikan nila diambil hanya bagian daging saja. Daging ikan nila dihomogenkan dengan cara diblender. Sampel ikan nila yang telah homogen diekstraksi menggunakan campuran asam asetat 1% dalam asetonitril ditambahkan natrium asetat. Mode Multiple Reaction Monitoring digunakan dengan memilih dua transisi ion untuk setiap residu. Metode ini divalidasi akhir berdasarkan acuan dari BBPBAT Sukabumi. Linearitas senyawa residu memiliki nilai R2 0,935 tidak sesuai hasil validasi oleh balai yaitu R2 > 0,995. Koefisien variasi analisis residu hormon dietilstilbestrol diluar nilai 20% yaitu 52,2 %. Persen perolehan kembali dari residu hormon dietilstilbestrol diluar rentang 70-110%. Residu hormon pada seluruh sampel tidak mencapai batas deteksi yang ditetapkan oleh balai 0,2 ppb.